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              ABI_7500熒光定量PCR儀如何使用內標進行質量控制?
              更新時間:2023-07-10   點擊次數:477次
                 在ABI_7500熒光定量PCR儀實驗中,使用內標可以有效地進行質量控制,以下是使用內標進行質量控制的步驟:
               
                1.內標的設計和選擇:設計一個特異性的內標是第一步,這個內標可以是基因組上的一個特定序列或者是一個已知的基因。這個內標的長度應該與待檢測的基因組序列相當,以便于在同時進行PCR反應時,可以擴增出與待檢測基因組大小相同的產物。
               
                2.內標加入的比例:標的比例應該與待檢測的基因組序列相同。這可以通過在反應體系中同時加入內標和待檢測的基因組序列的引物和探針來實現。
               
                3.內標的擴增:內標應該與待檢測的基因組序列同時擴增。這可以通過在反應體系中同時加入內標和待檢測的基因組序列的引物和探針來實現。
               
                4.內標的檢測:在結束后,通過熔解曲線分析產物,可以檢測內標是否正確地擴增。如果內標擴增出了正確的產物,那么說明實驗的質量控制是有效的。
               
                5.內標的驗證:在進行PCR實驗時,需要驗證內標的擴增效果。這可以通過對一系列已知濃度的內標進行PCR反應來實現。如果內標的擴增產物符合預期的熔解曲線,那么就可以確認內標是有效的。
               
                6.內標的應用:通過使用內標,可以評估熒光定量PCR實驗的精密度和靈敏度。內標可以用于評估實驗中的變異系數和標準差,從而確定實驗的精密度。同時,通過使用內標還可以評估實驗的靈敏度,因為內標的濃度可以影響實驗的線性范圍和檢測下限。
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